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核酸檢測實驗室污染原因（實驗室設(shè)計與建設(shè)注意事項）
發(fā)布：admin 發(fā)布時間：2021-12-22 21:35:10 瀏覽：
目前國內(nèi)所有二級以上綜合醫(yī)院都具備了核酸檢測能力，大部分醫(yī)院也設(shè)立了PCR實驗室，高強度的核酸檢測任務(wù)已然成為了我們檢驗人的工作常態(tài)，但是，如果一旦出現(xiàn)實驗室污染，可能會造成假陽性結(jié)果，導(dǎo)致結(jié)果不可信，甚至可能會危及實驗室工作人員安全。
應(yīng)對核酸檢測實驗室污染的最好辦法就是防范于未然，今天我們就帶大家了解一下實驗中我們?nèi)绾伪苊夂蜏p少污染的產(chǎn)生以及處理污染。
一、污染的產(chǎn)生
在新冠病毒核酸檢測過程中 ，常見以下幾種污染類型 ：擴增片段的污染 ( 產(chǎn)物污染 ) ;天然基因組 DNA 的污染、試劑 污 染 ( 貯存液或工作液 ) 以及樣本間交叉污染 。核酸檢測實驗室污染的主要來源是擴增產(chǎn)物的污染 。
實驗室應(yīng)通過以下途徑及時發(fā)現(xiàn)污染 ：
1、采用每次檢測過程至少3個陰性對照隨機置于臨床樣本中間參與提取全過程。
2、每天對實驗室室內(nèi)空氣進行采樣監(jiān)測?？諝獗O(jiān)測范圍應(yīng)至少應(yīng)包括樣本制備區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)。
3、定期對實驗室臺面、門把手、儀器設(shè)備表面進行取樣監(jiān)測。
4、陽性樣本采用另外一到兩種更為靈敏且擴增不同區(qū)域的核酸檢測試劑對原始樣本進行復(fù)核檢測。
二、污染的防控
01
嚴格實行實驗室各功能分區(qū)
原則上新冠病毒核酸檢測實驗室應(yīng)當設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲存和準備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)。
根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當合并。各區(qū)域在物理空間上應(yīng)當是完全相互獨立的。傳遞窗滿足密封性要求，不能有空氣的直接相通。各項檢測工作應(yīng)嚴格按相應(yīng)規(guī)定在各自的區(qū)域內(nèi)進行，嚴禁在樣本制備區(qū)配制試劑。
各區(qū)的功能是：
1、試劑儲存和準備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應(yīng)混合液的制備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。
2、樣本制備區(qū)：轉(zhuǎn)運箱的開啟，樣本的滅活(適用時)，核酸提取及其加入至擴增反應(yīng)管等。
3、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)：核酸擴增和產(chǎn)物分析區(qū)。
02
確保實驗室人、物及空氣單向流動
核酸檢測實驗室的人、物及空氣流向按照試劑儲存和準備區(qū)→樣本制備區(qū)→擴增和產(chǎn)物分析區(qū)，防止擴增產(chǎn)物隨人流、物流及空氣進入擴增前的區(qū)域?？諝饬飨驊?yīng)按照從試劑儲存和準備區(qū)→樣本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進行。
03
實驗室檢測安全管理
(1)基本要求
核酸檢測應(yīng)當在生物安全二級實驗室進行，并應(yīng)在生物安全風險評估的基礎(chǔ)上，采取適當?shù)膫€體防護措施，包括手套、口罩和隔離衣等。開展新冠病毒核酸檢測的實驗室應(yīng)當制定實驗室生物安全相關(guān)程序文件及實驗室生物安全操作失誤或意外的處理操作程序，并有記錄。
(2)實驗室做實驗前安全要求
應(yīng)使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進行桌面、臺面及地面消毒。消毒液需每天新鮮配制，不超過24小時。轉(zhuǎn)運至實驗室的標本轉(zhuǎn)運桶應(yīng)在生物安全柜內(nèi)開啟。轉(zhuǎn)運桶開啟后，使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精對轉(zhuǎn)運桶內(nèi)壁和標本采集密封袋進行噴灑消毒。取出標本采集管后，應(yīng)首先檢查標本管外壁是否有破損、管口是否泄露或是否有管壁殘留物。確認無滲漏后，推薦用0.2%含氯消毒劑噴灑、擦拭消毒樣品管外表面(此處不建議使用75%酒精，以免破壞標本標識)。如發(fā)現(xiàn)滲漏應(yīng)立即用吸水紙覆蓋，并噴灑有效氯含量為0.55%的含氯消毒劑進行消毒處理，不得對標本繼續(xù)檢測操作，做好標本不合格記錄后需立即進行密封打包，壓力蒸汽滅菌處理后銷毀。
如為采樣管為非滅活管，實驗室操作人員在進行標本熱滅活時，溫浴前需旋緊標本采集管管蓋，必要時可用封口膜密閉管蓋;溫浴過程中可每隔10分鐘將標本輕柔搖勻1次，以保證標本均勻滅活;溫浴后標本需靜置至室溫至少10分鐘使氣溶膠沉降，隨后再開蓋進行后續(xù)核酸提取。
(3)核酸提取和檢測安全要求
在進行核酸提取和檢測時應(yīng)盡可能在生物安全柜內(nèi)進行操作。如為打開標本管蓋或其他有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作，則必須在生物安全柜內(nèi)進行。
(4)實驗室操作結(jié)束后清潔要求。
需要對實驗室環(huán)境進行清潔，消除可能的核酸污染。
?、賹嶒炇铱諝馇鍧崱嶒炇颐看螜z測完畢后，可采用房間固定和/或可移動的紫外燈進行紫外照射2小時以上。必要時可采用核酸清除劑等試劑清除實驗室殘留的核酸。
?、诠ぷ髋_面清潔。每天實驗后，使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進行臺面、地面清潔。
?、凵锇踩裣尽嶒炇褂煤蟮暮牟膹U棄物放入醫(yī)療廢物垃圾袋中，包扎后使用0.2%含有效氯消毒液或75%酒精噴灑消毒其外表面。消毒后將垃圾袋帶出生物安全柜放入實驗室廢棄物轉(zhuǎn)運袋中。試管架、實驗臺面、移液器等使用75%酒精進行擦拭。隨后關(guān)閉生物安全柜，紫外燈照射30分鐘。
④轉(zhuǎn)運容器消毒。轉(zhuǎn)運及存放標本的容器使用前后需使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進行擦拭或噴灑消毒。
?、菟芰匣蛴袡C玻璃材質(zhì)物品清潔：使用0.2%含氯消毒劑或過氧乙酸或過氧化氫擦拭或噴灑。
(5)轉(zhuǎn)運容器消毒
轉(zhuǎn)運及存放樣本的容器使用前后需使用有效氯含量為0.2%的消毒劑或75%酒精進行擦拭或噴灑消毒。
04
強化實驗室檢測過程控制
實驗室接到樣本后，應(yīng)當在生物安全柜內(nèi)對樣本進行清點核對。按照標準操作程序進行試劑準備、樣本處理、核酸提取、核酸擴增、結(jié)果分析及報告。實驗室應(yīng)當建立可疑樣本和陽性樣本復(fù)檢的流程。
(1)試劑準備
應(yīng)當選擇國家藥品監(jiān)督管理部門批準的試劑，并在選擇樣本采樣管和核酸提取試劑時，使用試劑盒說明書上建議的配套樣本采樣管和提取試劑。
(2)樣本滅活
已經(jīng)使用含肌鹽的滅活型樣本采樣管的實驗室，這一環(huán)節(jié)無需進行滅活處理，直接進行核酸提取。使用非滅活型樣本采樣管的實驗室，可采用56℃孵育30分鐘熱滅活的處理方式。
(3)核酸提取
將滅活后的樣本取出，在生物安全柜內(nèi)打開樣本采樣管加樣。核酸提取完成后，立即將提取物進行封蓋處理。在生物安全柜內(nèi)將提取核酸力口至PCR擴增反應(yīng)體系中。
(4)核酸擴增
將擴增體系放入擴增儀，核對擴增程序是否與試劑說明書相符，啟動擴增程序。擴增后的反應(yīng)管不要開蓋，直接放于垃圾袋中，封好袋口，按一般醫(yī)療廢物轉(zhuǎn)移出實驗室處理。
三、污染的消除
實驗室一旦發(fā)生污染，檢測工作應(yīng)立即停止，直到確認消除污染后才能重新開始檢測。首先，要查找污染源和明確污染范圍。然后，根據(jù)污染源和污染范圍采取有效的去污染措施，結(jié)合各種不同方法以達到最佳效果。
實驗室污染的處理：
1.標本污染生物安全柜的操作臺造成局限污染時：
立即用吸水紙覆蓋，并使用0.55%含氯消毒劑進行噴灑消毒。消毒液需要現(xiàn)用現(xiàn)配，24小時內(nèi)使用。
2.標本傾覆造成實驗室污染時：
保持實驗室空間密閉，避免污染物擴散。立即使用潤濕有0.55%含氯消毒劑的毛巾覆蓋污染區(qū)。必要時(如大量溢撒時)可用過氧乙酸加熱熏蒸實驗室，劑量為2g/m³，熏蒸過夜;或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧，用量8ml/m³，作用1-2小時;必要時或用高錳酸鉀-甲醛熏蒸：高錳酸鉀8g/m³，放入耐熱耐腐蝕容器(陶罐或玻璃容器)，后加入甲醛(40%)10ml/m³，熏蒸4小時以上。熏蒸室內(nèi)濕度60%-80%。
3.清理污染物時：
嚴格遵循活病毒生物安全操作要求，采用壓力蒸汽滅菌處理，并進行實驗室換氣等，防止次生危害。
一套合格的實驗室設(shè)計，不外乎以下三點實驗室建設(shè)
四、實驗室布局設(shè)計
1、實驗室的布局是否合理對教學和科研工作的效果有著直接的關(guān)系。實驗室(大樓)的布局應(yīng)有利于教學和科研工作，有利于學科的發(fā)展，有利于各部門的協(xié)作，有利于綜合利用和“三廢”處理。實驗室(大樓)布局的好壞，長期影響它的工作效率和經(jīng)濟性。
2、實驗室的布局是否具有靈活性擴展性
1)還要考慮具體實驗工作的特點和要求，使之具有符合需要的實驗室使用面積和空間。例如，實驗室的高度，要事先考慮到能安裝、搬運大型設(shè)備。
2)實驗室的面積具有較大的靈活性，在布局時不能只考慮當前的需要，還要考慮到將來的發(fā)展。
五、實驗室基礎(chǔ)系統(tǒng)設(shè)計
1、電力對于現(xiàn)代化實驗室來說, 通常有一些精密、貴重的儀器設(shè)備, 要求提供穩(wěn)壓、恒流、穩(wěn)頻、抗干擾的電源，還必須建立不中斷供電系統(tǒng)，還要考慮電源負荷大小, 考慮今后可能的發(fā)展情況留有余地。為方便使用, 應(yīng)在合適的位置預(yù)留220V 、380V 的插座,以保證不同儀器設(shè)備的正常使用。
2、給排水由于各個實驗室的任務(wù)、性質(zhì)不同,供水和排水的要求也不一樣, 有的實驗室要求有不間斷供水條件, 有的實驗室還必須對排放的廢水進行凈化處理。
3、網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)化綜合布線系統(tǒng), 可以通過一次性布線工程提供各種語音、數(shù)據(jù)、圖像或視頻通信系統(tǒng)的通信線路, 能夠滿足目前絕大多數(shù)通信的要求。
六、實驗室特殊系統(tǒng)設(shè)計
1、潔凈度
1)不同類型的儀器設(shè)備對工作環(huán)境的要求是不相同的, 現(xiàn)代化實驗室由于配備較多的高精尖儀器設(shè)備, 對實驗室的工作環(huán)境提出了更高的要求。
2)如果實驗室中的空氣含灰塵較多, 很容易滲入到儀器設(shè)備的內(nèi)部、落在零件的表面上。還有一些是減少微生物污染的，所以要達到一些潔凈度等級。
2、通風
1)許多實驗室承擔著大量實驗任務(wù), 由于人數(shù)多, 實驗時間長, 容易造成實驗室內(nèi)空氣污濁, 必須重視實驗室的通風換氣。
2)特別是化學類實驗室、生物、醫(yī)學類實驗室, 實驗時所使用的化學藥品或者實驗過程及其產(chǎn)物常常產(chǎn)生一些有害氣體, 對人體不利。
3)整體實驗室的送、回、排風及設(shè)備的排風關(guān)系到整個實驗室的后期運營與維護。
